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当前位置:水产资料 → 鱼病知识——甲壳类动物 今天是:2020年10月31日 星期六

鱼病知识——甲壳类动物疫病

出处:水生动物健康评估公众号 作者: 水产养殖网 2020-04-06 21:52:00
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引言
疫病是指发生在人、动物、或植物身上,并具有可传染性的疾病的统称,一般由寄生虫、细菌、病毒等微生物引起,其传播有三个要素,分别是传染源、传播途径和易感宿主,切断其中之一即可防止疫病流行。疫病一旦爆发,会有什么后果呢? 一个是危害人与动物健康,另一个造成重大经济损失。举两个大家熟悉的例子,比如禽流感(人畜不安);比如二师兄又涨价了(经济损失)。

在世界动物卫生组织(OIE)编著的《水生动物诊断试验手册》第六版中,列出了十种甲壳类动物疫病,在后续的推文中会给大家一一介绍。由于世界动物卫生组织(OIE)目前列出的大多数甲壳类疫病均为对虾疫病,因此本系列推文所讨论的有关甲壳动物疫病的原则和方法以对虾为重点。

疫病诊断方法
传统的病原形态学方法(如直接镜检、病理组织学和电镜观察)、用易感指示宿主的生物鉴定方法及分子方法(如基因探针、聚合酶链式反应PCR)等。

两种实用诊断技术
1.直接镜检
直接使用显微镜检查样本要求在采集后尽快进行,最好选用活样本,次选新鲜或冷藏样本,或使用10%福尔马林缓冲液固定的样本。
2.组织学技术
采用尽量不会引起应激反应的方法收集虾样,可将虾固定在水槽或池塘边,或装入氧气充足且注满水的容器中运至实验室。需要准备充足的固定液,固定液一般应至少为组织样品量的10倍(如一份10克的虾需要100毫升固定液)。推荐采用Davidson’s AFA固定液,这种固定液作用快速,能减少十足甲壳动物的自溶变化,尤其是对虾、罗氏沼虾、龙虾和热带及亚热带养殖的其他十足甲壳动物,且所含酸性物质可除去石灰质角质层。

1L Davison’s固定液的成分如下:
 330 mL 95%乙醇
  220 mL 100%福尔马林(37%~39%饱和甲醛水溶液)
 115 mL冰乙酸
 335 mL自来水(海产的,则用海水替代)
将固定液贮存在带有安全瓶塞的玻璃瓶或塑料瓶中,室温保存。
 
Davidson's AFA固定液使用方法1.对于幼体和仔虾
由于其体型太小而不容易用结核菌素注射器(一种可定量调节剂量的连续注射器)注入固定液,可通过细网孔栅或巴斯德吸管选择并收集样本。选取样本虾(或其他十足甲壳动物)直接浸没在固定液中,固定12~ 24h后转移到70%乙醇中保存。

2.对于太小而不易注射的略大仔虾和很小的稚虾
选取并收集样本,利用注射针或尖头镊切割角质层,使固定液更容易渗透进组织。将选取的虾样本(或其他十足甲壳动物)直接浸没在固定液中,固定12~ 24h后转移到50%~ 70%乙醇中保存。

3.对于较大的仔虾、稚虾和成虾
将固定液用手术针和注射器注入活虾(或其他十足甲壳动物)体内。注射针规格视虾(或十足甲壳动物)大小而定,如对仔虾和小稚虾应使用27号注射针。应首先注射肝胰腺,在两个或更多点注射。保证固定液用量充足,足以使肝胰腺变成白色到橘红色(使用Davidson's AFA时)。接着将固定液注人头胸廓周边部位、前腹部和后腹部。
注意:1.应在不同的部位注入固定液,头胸部的注入量应多于腹部。应在不同部位注入固定液,头胸廓部尤其是肝胰腺的注入量应多于腹部。

2.确保固定液用量充足的方法是注入相当于虾(或其他十足甲壳动物)重量5%~ 10%的固定液,所有生命指标应很快停止,并在注射部位出现明显的颜色变化。注射后,立即用解剖剪从第六腹节到额剑基部剪开角质层,应特别注意不要剪到下层组织。头胸廓部位的切口应位于背部正中线的侧面,同时,腹部切口应大致接近侧面中间。

3.12g以上的虾(和大多数其他甲壳动物):注入固定液后,至少在头胸和腹部交界处的后方横切一次,还可在腹部中间再切断一次。

4.大型甲壳动物(如龙虾、蟹、成体对虾、成体罗氏沼虾、某些蟹种和处于某些生命阶段的蟹等):注射固定液后分离器官,完成样本固定后,按上述方法处理。
注射后,二分或三分切开,或切除主要器官,并将样本浸泡在固定液中(固定液和样本组织比例为10:1)。依据甲壳动物大小可在室温下固定24~72h。如需使蟹、龙虾、螯虾等的壳充分脱钙(固定液中含有冰醋酸),在Davidson's AFA固定液中固定更长时间。固定后,应将样本转到70%乙醇中,以便长期贮存。

需记录样本收集完整过程:肉眼观察甲壳动物的状态、物种、年龄、重量、来源(野生或养殖,如为养殖动物,记录水槽或池塘号、品系号等),以及随后可能需要的其他相关信息。

样本固定、贮藏和运输到实验室期间,标签应与样本放在在同一容器中。应使用2号软铅笔在防水纸上做标记。推荐使用塑料纸。由于墨汁会被乙醇溶解,不建议使用墨水笔或记号笔。

样本运输和装运
由于无法邮寄或托运大量乙醇,推荐采用以下方法:将样本从70%乙醇中移出。可用防漏旋盖塑料瓶装运幼体、仔虾或小的稚虾,如必须用玻璃瓶,则需包好以防破损。对于较大的样本,用白色纸完全包住样本(不要用未加工棉花或棉织物),然后将包好的样本浸透在装70%乙醇的可密封塑料袋内,放人标签并密封塑料袋,再装人第二个密封袋中。可将多个小密封袋放人一个有适当标记且防碎的坚固容器中装运。


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