论文解读—杂交鳢脑细胞系用于罗非鱼湖病毒的检测 |
| 出处：公众号水生动物健康评估 作者：黎源 水产养殖网 2019-11-22 09:31:00 |
Channaargus和Channa maculata属于鳢科家族。杂交鳢是雄性乌鳢Channa argus和雌性斑鳢Channa maculata杂交后代。杂交鳢因其生长速度快、抗病性强、可接受商品化饲料等明显的杂种优势，在养殖过程中一直是黑鱼的优势种，已成为珠江三角地区的主要养殖品种。
罗非鱼湖病毒(TiLV)是一种高传染性病毒，与全球罗非鱼养殖的疾病暴发有关。通常，细胞系常被用于病毒分离和确定病毒-宿主相互作用的工具。世界动物卫生组织（OIE）提倡利用细胞培养分离作为病毒鉴定的金标准。杂交鳢E−11细胞系被用于TiLV的体外培养。此外，与其他细胞相比，如TmB或OmB，E−11细胞更有利于TiLV复制，获得更高的病毒滴度。
为了检测和分离鱼类病毒，已经建立了许多鱼类细胞系。来自不同物种不同组织的细胞系对于研究物种在细胞水平上对病毒感染的特异性反应具有重要意义。此外，病毒在细胞培养上的传播将促进针对多种鱼类疾病的疫苗的开发。鱼类细胞系已成为病毒学研究的重要模型和工具。
今天为大家介绍一篇论文，该研究通过建立杂交鳢脑细胞系(CAMB)，揭示了及其对TiLV分离和复制检测的适用性。结果表明TiLV在CAMB细胞内具有复制的能力，本研究对于阐明罗湖病毒病(TiLVD)的发病机制具有深远的意义，引用信息如下：
研究结果如下：
1.CAMB细胞系建立和鉴定：利用0.25%胰蛋白酶溶液和0.1%胶原酶i的混合物，从杂交鳢的脑组织中建立CAMB细胞系。细胞在L-15培养基中培养，添加20%胎牛血清，每3-4天传代一次。10次传代后，细胞按1:3-4传代，间隔2-3天，培养基中FBS浓度降低至10%。形态学上，在CAMB细胞的初始传代中观察到含有成纤维细胞和上皮细胞的异质群体。然而，在第15代传代后，均匀的长薄状的上皮细胞占多数。20代后，在6%-8%胎牛血清L-15培养基中CAMB细胞传代，比例为1:3或1:4。传代后，在这些高传代中只观察到上皮样细胞。
2.CAMB细胞生长条件：M199是最适合CAMB细胞的培养基，FBS浓度为15%和20%时，生长速度最快。在27℃时生长情况最好。
3.CAMB 细胞冻存效果和染色体核型分析：从形态学上看，低温保存和解冻后细胞无明显变化，细胞活力良好。CAMB细胞的染色体数目异常，在36到128之间。
4.CAMB 细胞对TiLV敏感性测定及病毒滴度测定：TiLV感染CAMB细胞系后其浓度在2 d逐渐增加，3 d后细胞病变，TCID50从100.65，到12 d后达到107.2 TCID50/mL。
5.免疫荧光标记TiLV感染的CAMB：感染细胞后，用IFA-TiLV特异性单克隆抗体检测病毒，结果显示感染CAMB的TiLV-2017A的荧光信号很强。
6.用CAMB上复制的TiLV感染罗非鱼：感染7 d，TiLV-2017A处理的实验鱼组织病理学改变明显。中央静脉周围可见白细胞浸润,部分肝坏死，脾脏巨噬细胞以及肾小管上皮细胞颗粒变性,溶解。
总结：该研究从杂交鳢脑中获得永久性生长的鱼细胞系CAMB，为提供TiLV病毒的分离和鉴定提供有用的工具。该细胞系的开发将为TiLV的检测、TiLV疫苗的制备以及疾病的控制和预防措施等奠定基础。此外，它还将开辟一个新的研究领域，如直接在细胞水平上研究体外TiLV发病机制。
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